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阿拉丁合成有机化合物配体——科研之星 在生物医药的浩瀚星空中，每一颗星星都代表着一个可能的突破。今天，我们要聚焦的是那些能够点亮科研之路的星星 —— 合成有机化合物配体。这些小分子是一系列通过化学合成方法得到的，能够与生物分子特异性结合的宝藏。它们不仅是药物设计的核心构件，也是实验研究中不可或缺的工具，直接影响着生物活性分子的发现与优化。 「应用」 （1）医药研发 作为药物分子的候选者，它们与疾病靶点的结合能力直接影响药物的疗效和安全性。 （2）实验研究 在实验室中，它们是研究生物分子功能、探索细胞信号传导路径的关键工具。 （3）药物设计 作为先导化合物，合成有机化合物配体在新药发现中起到决定性作用，通过与生物靶标的相互作用，优化药物的疗效和安全性。 （4）分子探针 在生物传感和分子成像中，它们作为信号放大和识别单元，为生物过程的监测提供了新的视角。 「为什么选择我们」 （1）品牌力量： 作为A股科创板上市企业，阿拉丁以强大的品牌影响力，赢得广泛认可。（2）创新先锋： 自主研发的阿拉丁品牌，覆盖四大科研领域，持续推动产品创新。（3）研发实力： 先进的研发设施和专业团队，确保技术领先和产品质量。（4）便捷电商： 依托电子商务平台，提供线上销售，优化购物体验。（5）生产基地： 在上海拥有自主的研发生产基地，确保生产效率和产品质量。（6）物流网络： 全国布局的现代化物流五大仓库，缩短交货时间，提升客户体验。（7）客户基础： 服务覆盖全部985和211高校，多家A股上市公司以及顶尖科研院所。（8）服务理念： 秉承“以进口替代为己任，让科研创新更便捷”的理念，持续提升服务。（9）市场认可： 成功上市，股票代码688179，展现公司实力和发展潜力。 探索更多，与阿拉丁一起，点亮科研的星光，照亮生命科学的未来。 产品货号产品名称规格或纯度包装规格T110598三（羟甲基）氨基甲烷EP, USP, 用于细胞培养测试, ≥99.9% (T)100g/500g/2.5kgC1127663-[2-(3,5-二甲基-2-氧代环己基)-2-羧基乙基]戊二酰胺95%250mg/1g/5g/25gA108470丙烯酰胺电泳专用级, ≥99%25g/100g/500g/1kg/5kg/12×500gP1111411,10-菲罗啉(无水)99%5g/10g/25g/100g/500gI131590碘乙酰胺超纯级,≥99% (NMR)5g/25g/100gI1068123-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)99%100mg/250mg/1g/5gP167764佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯98%1mg/5mg/10mg/25mg/50mgH116380乌洛托品(易制爆)AR, ≥99.0%100g/500g/5kg 欢迎访问我们的官网，了解阿拉丁合成有机化合物配体的更多信息。
阿拉丁代谢物 ｜ 解码生物体的代谢蓝图 「一」 代谢物——生物体内外的化学“翻译官” 代谢物是生物体内外的化学物质，反映了生物在不同生理和病理状态下的代谢活动。它们不仅是研究生物标志物和代谢途径的关键工具，更是解析生命奥秘的重要窗口。 「二」代谢组学——揭示生命的“翻译图谱” 代谢组学通过全面分析生物体内的所有代谢物（代谢组），揭示生物在不同环境和条件下的全面代谢状态。这种系统生物学方法不仅有助于理解生物的生理状态和疾病机制，还为药物研发、疾病诊断和个性化医学提供了重要支持。 「三」阿拉丁®代谢物的科研应用 （1）生物标志物的探索者：精确捕捉并分析生物体内的微小变化，为早期疾病诊断提供重要依据，助力精准医疗。（2）药物开发的智囊团：深入研究药物在体内的代谢途径和安全性，加速新药研发进程，确保药物的有效性和安全性。（3）健康风险的预测师：通过代谢物分析，评估个体的健康状况和潜在风险，支持个性化健康管理和预防性医疗。 为什么选择阿拉丁？ （1）卓越的品牌影响力和信誉保证：作为科创板上市公司，阿拉丁连续十几年被评选为“最受用户欢迎的试剂品牌”，深受全国科研院所、高等院校和A股上市公司的信任。（2）全面的产品覆盖和高效的供应链：拥有覆盖全国的现代化物流仓库和超过7.5万种常备库存产品，为您提供广泛、全面的选择。（3）优质的产品和服务创新：阿拉丁通过电子商务平台，为科研工作者提供便捷的在线购物体验。我们以进口替代为己任，持续优化产品结构和服务意识，为科研创新提供可靠支持。（4）科技驱动和持续创新：我们通过不断提升研发能力和产品质量，推动科学进步。作为上市公司，阿拉丁公司以稳定的生化试剂质控和标准，为客户提供信心和支持。 产品货号产品名称规格/纯度包装规格U111899尿素99.999% metals basis25g/100g/500g/5kgL118493L-乳酸≥98%(T)1g/5g/25g/100gG116306D-(+)-葡萄糖超纯级,≥99.5%25g/100g/500g/1kg/5kgK105570α-酮戊二酸99%,用于细胞培养25g/100gH2748824-羟基壬烯醛≥97%1mg/5mg/25mg/50mg/100mgH110523氢化可的松98%1g/5g/25g/100gD106380去氢表雄酮99%1g/5g/25g/100g/500gP129960前列腺素E1≥98%(HPLC)1mg/5mg/25mg/100mg/250mg 欢迎访问我们的官网，了解更多关于阿拉丁代谢物的信息。
固相多肽合成——高效策略，革新技术 固相肽合成技术（SPPS）是一种生物化学技术，自20世纪60年代问世以来，已成为合成肽和蛋白质的主要方法。1963年，罗伯特·布鲁斯·梅里菲尔德（Robert Bruce Merrifield）首次提出了固相肽合成的概念，这一突破性工作不仅极大地提高了肽合成的效率和可控性，还为他赢得了1984年的诺贝尔化学奖。 在固相肽合成中，肽链的生长是通过逐步加入氨基酸单体来实现的。与溶液相合成不同的是，固相肽合成中，肽链被固定在一个不溶性树脂载体上，这样可以简化反应后的纯化步骤。合成过程从C端氨基酸开始，通过在其α氨基上连接到树脂载体上，然后依次将保护好的氨基酸逐一连接到生长中的肽链上。每次氨基酸连接完成后，通过简单的过滤步骤去除反应中未反应的试剂和副产物，从而减少了传统溶液相合成中需要复杂纯化的步骤。 SPPS的核心在于两个主要步骤：脱保护和偶联。首先，肽链上的保护基团被移除，使得下一个氨基酸能够结合到肽链的游离氨基上。常用的脱保护试剂包括三氟乙酸（TFA）和二异丙基乙胺（DIPEA），这些试剂能够有效去除保护基而不损坏肽链。脱保护后，氨基酸被活化以便偶联到生长中的肽链上。常用的偶联试剂包括HBTU、HATU等，它们能够促进氨基酸与肽链上的游离氨基形成肽键。 SPPS的主要优势在于其高效性和自动化潜力。现代的自动化合成器可以在短时间内合成数十个氨基酸长的肽链，使得合成复杂肽和小型蛋白质变得可行。此外，由于合成是在固相载体上进行的，反应物和副产物可以通过简单的洗涤步骤被除去，这大大简化了后期的纯化步骤。 在SPPS的发展过程中，出现了两种主要的技术流派：Fmoc和Boc策略。这两种方法的区别在于它们使用的氨基酸保护基团和脱保护条件。Fmoc策略使用9-芴甲氧羰基（Fmoc）作为保护基，脱保护时使用碱性条件，如哌啶，而Boc策略使用叔丁氧羰基（Boc）作为保护基，脱保护时使用酸性条件，如三氟乙酸。Fmoc策略由于其温和的脱保护条件和较少的副产物形成，逐渐成为主流。 Boc策略是最早发展的固相肽合成方法之一，它使用叔丁氧羰基（Boc）作为氨基保护基团。在每个氨基酸残基的连接过程中，Boc基团通过酸性条件（通常是三氟乙酸）去保护，暴露出氨基以进行下一步的肽键形成。与Boc策略相比，Fmoc策略的开发则是在为了避免酸性条件对肽链的潜在损伤的背景下提出的。Fmoc策略采用9-芴甲氧羰基（Fmoc）作为保护基团，利用碱性条件（通常是哌啶溶液）去除Fmoc基团，从而暴露氨基以进行下一步反应。 以Fmoc策略为例，首先，在合成开始前需要选择合适的树脂作为固相载体，常见的有聚苯乙烯树脂（例如Wang树脂或Rink amide树脂），这些树脂具有能够与氨基酸形成共价键的官能团。合成反应的第一步是将C端氨基酸固定在树脂上，通过与树脂上活化的官能团反应，形成稳定的酰胺键。接下来，使用20%的哌啶溶液去除氨基酸上的Fmoc保护基团，暴露出游离的氨基。然后，加入下一步要连接的氨基酸，该氨基酸通常使用羧基活化剂（例如HBTU、HATU或DIC）进行预先活化，从而促进其与前一氨基酸的氨基形成肽键。这一循环过程在合成每个氨基酸时重复进行，直到整个多肽链合成完成。每次反应结束后，合成过程中使用的溶剂（如DMF、DCM）和副产物都可以通过简单的洗涤步骤去除。 Boc策略的合成流程虽然与Fmoc策略类似，但其细节有所不同。Boc策略首先也是将C端氨基酸与树脂载体偶联，形成酰胺键。随后，通过使用强酸性试剂（如三氟乙酸，TFA）去除氨基酸上的Boc保护基团，暴露出游离氨基。然后，加入下一个Boc保护的氨基酸，在存在羧基活化剂的条件下，形成肽键。与Fmoc策略不同，Boc策略中由于需要使用酸性条件进行脱保护，因此其应用可能对某些酸敏感的氨基酸或肽链有潜在的影响。尽管如此，Boc策略仍然在一些特定的肽合成中具有独特的优势。 无论是Fmoc还是Boc策略，每个步骤的反应条件和试剂选择都需精确控制，以确保多肽链的合成高效且准确。最终，通过从树脂上切下肽链并进行纯化，获得目标多肽。两种策略各自在特定应用中展现了独特优势，为研究人员提供了灵活而强大的多肽合成手段。 如需了解更多信息，请访问我们的网站：阿拉丁：
科研开学季，【阿拉丁】生物满赠礼！ 尊敬的科研工作者们，在这个科研新篇章的开学季，我们为您带来了一场专业与实用的双重盛宴。从2024年9月1日至12月31日，凡在官网购买阿拉丁品牌的蛋白质、抗体及生物活性小分子家族产品，单笔订单达到指定金额，即可尊享我们的“科研精粹，生活添彩礼包”。这份礼包不仅包含了我们精心挑选的高品质日用品，更是对您科研专业性的认可与支持，让您在追求科研卓越的同时，也能享受到日常生活的便捷与舒适。 活动产品范围：蛋白质、抗体及生物活性小分子家族产品活动时间：2024年9月1日-2024年12月31日 我们的产品，以卓越的品质和精准的性能，一直是您科研道路上的得力助手。让我们一起开启科研的新篇章，享受专业与实用的双重盛宴。期待您的参与，共同见证科研的每一次突破！ 注：1、赠品领取方式：活动满额赠品将在活动期间随下单订单一同发货，同时，阿拉丁默认用户下单收货地址为礼品派发地址。2、阿拉丁官网全部蛋白质、抗体及生物活性小分子目录下的产品将参与本次活动，其余产品及积分礼品不在本次活动范围内。3、本次活动礼品限量赠送且颜色随机，按照下单时间进行审核，审核通过后先到先得，送完即止。4、若符合活动规则的订单在指定礼品派送完后，阿拉丁有权决定用活动其他同等价值的礼品代替，但将尽量提前通知用户（客服联系）。5、用户承诺并保证其完全有权将个人及单位信息提供给阿拉丁保存记录，用户应保证其所填信息的真实性、完整性和合法性，并且保证不会侵犯任何的合法权利。如因用户违反本承诺，将赔偿阿拉丁由此产生的全部损失。6、礼品发放前阿拉丁需要核实用户有无超账期欠款，结清超期欠款后才可发放礼品。7、上海阿拉丁生化科技股份有限公司享有对本活动的最终解释权。
溴化乙锭——美丽而危险 溴化乙锭（Ethidium bromide，EtBr）是一种经典的荧光染料，在分子生物学研究中有着广泛应用。其化学结构为三苯并咪唑，能够通过嵌入DNA或RNA 的碱基对之间进行非共价结合，从而显著增强荧光信号。这种染料最初作为兽医用药被发现，因其具有强效的诱变性和便捷的核酸染色能力，现已广泛应用于核酸检测、电泳分析及多种生物医学实验中。 一、 化学特性与结合机制 溴化乙锭是一种小分子染料，能够嵌入双链DNA和RNA的碱基对之间，显著增强其荧光强度。与双链 RNA 结合时，荧光强度可增强21倍；与双链DNA 结合时，荧光强度可增强25倍。虽然溴化乙锭在结合单链和三链DNA时亲和力较低，但其结合特性仍足以抑制DNA聚合酶的活性。这些特性使其成为研究 DNA复制、修复及转录的重要工具。 二、 溴化乙锭在科研中的应用 核酸检测 溴化乙锭在分子生物学实验中广泛用于核酸检测，特别是在琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳中。通过在凝胶中加入溴化乙锭，研究人员可以在紫外光下观察到清晰的DNA或RNA条带，从而确定核酸的存在和大小。这种方法简便且高效，是实验室常规操作之一。 荧光定量分析 溴化乙锭的荧光特性使其在荧光定量分析中得到了广泛应用。例如，在定量 PCR和定量RT-PCR中，溴化乙锭通过测量荧光强度来定量分析DNA或RNA。溴化乙锭的高荧光增强效应显著提高了这些分析方法的灵敏度和准确性，广泛用于基因表达研究、病毒载量检测等领域。 细胞膜完整性评估 在细胞生物学研究中，溴化乙锭常用于评估细胞膜的完整性。由于溴化乙锭不能穿透完整的细胞膜，因此只有在细胞膜受损时才能进入细胞并与核酸结合发出荧光。这一特性使溴化乙锭成为检测细胞死亡和细胞膜损伤的有力工具，可用于药物筛选和细胞毒性评估。 线粒体 DNA 研究 溴化乙锭在线粒体DNA研究中也发挥着重要作用。线粒体DNA是研究细胞代谢、遗传疾病和衰老过程的重要对象。溴化乙锭能够有效地分离和分析线粒体DNA，为深入研究其功能提供了工具。例如，在研究线粒体DNA复制和突变时，溴化乙锭可用于追踪和定量分析线粒体DNA。 基因组编辑和转基因研究 在基因组编辑和转基因研究中，溴化乙锭也起到了重要作用。在使用 CRISPR-Cas9等基因编辑技术时，研究人员需要精确检测和定量目标基因的编辑效果。溴化乙锭染色结合荧光显微镜观察，可以帮助研究人员评估编辑效率和识别成功编辑的细胞。此外，在转基因生物的筛选过程中，溴化乙锭可用于检测转基因的插入和表达情况。 三、 光谱特性 溴化乙锭具有独特的光谱特性，其紫外/可见光吸收峰位于多个波长处，包括210 nm、285 nm、316 nm 和343 nm。当溶解在不同溶剂中时，这些吸收峰会发生变化。例如，在水中溶解时，吸收峰位于480 nm，而在甲醇中溶解时则位于520 nm。当与核酸结合时，溴化乙锭的吸收峰会发生红移（向更长波长移动）。 荧光特性 溴化乙锭的荧光特性在不同溶剂和环境中有所不同。在水溶液中，溴化乙锭的激发波长为526 nm，发射波长为605 nm。在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，其激发波长为360 nm，发射波长为590 nm。此外，在10 mM TBE 缓冲液（pH 8.0）中，其激发波长为525 nm，发射波长为600 nm。随着溶剂极性的降低，溴化乙锭的荧光产量增加，使其在各种生物实验中具有广泛应用。 四、 储存和处理 溴化乙锭应在避光、干燥的条件下储存，以确保其稳定性。在室温下储存时，溴化乙锭粉末可保持稳定至少两年。处理溴化乙锭时应采取适当的安全措施，因为它是一种已知的诱变剂和潜在的致癌物。废弃的溶液和材料应按照规定的生物危害废弃物处理程序进行处理。 五、 配制溶液 在室温下，溴化乙锭在水中以10 mg/mL 的浓度溶解，形成红色溶液。它在水中最多可溶解到20 mg/mL米乐YY易游,，在乙醇中可溶解到2 mg/mL。水或PBS中的储备溶液在避光条件下至少可稳定两年。 六、 电泳染色步骤 在电泳实验中，溴化乙锭通常以0.5mg/mL 的浓度添加到凝胶和电泳缓冲液中。电泳后，可以将凝胶浸入含有溴化乙锭的缓冲液或水中染色30-45分钟。在某些情况下，可以通过将染色后的凝胶浸泡在水或1 mM MgSO4中进行脱色，以减少背景荧光，从而提高DNA的检测灵敏度。 七、 安全注意事项 由于溴化乙锭具有诱变和致癌风险，处理时应佩戴防护手套和护目镜，并在通风良好的地方进行操作。所有含有溴化乙锭的废弃物应按生物危害废弃物处理，确保对环境和人体的安全。 溴化乙锭作为一种重要的分子生物学研究工具，其独特的荧光特性和广泛的应用领域使其在核酸检测和分析中发挥着关键作用。通过对其特性的深入了解和正确的使用方法，可以更好地应用溴化乙锭进行科学研究。
重组抗体 ｜ 携手阿拉丁，共创科研新高度 重组抗体（Recombinant Antibodies）是利用重组DNA 及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配，经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。这些抗体经过精确的设计和工程改造，允许特定的靶向和定制功能。 【重组抗体的四大优势】 1. 良好的批次间一致性：重组抗体的生产过程高度可控，确保了实验结果的可重复性。2. 可规模化生产：体外生产方法适合大规模生产，保证了抗体的长期稳定供应。3. 工程化适应性强：了解抗体的肽序列为工程化提供了多种可能性，如同种型转换和种属转换，增加了实验的灵活性。4. 无动物源性生产：避免了使用动物，减少了伦理和成本问题。 【主要应用领域】 1. 肿瘤研究与治疗2. 神经科学研究3. 药物开发4. 免疫诊断 【为什么选择阿拉丁】 1. 种类丰富：目前阿拉丁有3000多种抗体产品，覆盖目前常见的各种靶点。2. 现货充足：重组抗体近两千款产品中，高达79.5%的现货率，库存充足，无需等待。3. 包装多样：每款产品设置3~4种包装规格，最多能到6种，满足不同实验用量需求。4. 验证完善：我们的重组抗体都会进行对应的实验验证，并将验证结果上传至官网，确保产品质量的可靠性。5. 免费试用装：阿拉丁推出抗体产品的试用装免费申领活动，真正的勇士敢于直面市场的检验，再好的宣传也比不过您的一次亲身试用。 重组抗体作为目前抗体领域的新技术产品，在科学研究中和医疗行业的应用日益广泛。阿拉丁致力于提供高质量的重组抗体产品，助力科研工作者在生命科学领域的探索与发现。 阿拉丁产品项目号产品名称Ab090843Recombinant Bcl-XL AntibodyAb005519Recombinant CA153 AntibodyAb102223Recombinant ERK1 AntibodyAb103920Recombinant FOXA2 AntibodyAb119824Recombinant p53 Antibody 欢迎访问我们的网站了解更多详情，并浏览我们全面的阿拉丁重组抗体。
Caspase免疫荧光染色方案 细胞凋亡是一种受严格调控的细胞死亡机制，其核心是半胱天冬酶（Caspase）的激活。免疫荧光染色是一种有效的技术，可以同时检测细胞样本中的半胱天冬酶和其他凋亡相关蛋白。 该实验方案用于一般性指南。对于具体的实验，需要根据所用样品和抗体进行优化。 常规流程 所需材料 -针对caspase的一抗，例如重组Caspase-3抗体，兔抗（Ab093013） -准备好样本并固定在载玻片上 - Triton X-100 - PBS -封闭缓冲液（PBS/0.1％Tween 20 + 5％血清） -结合二抗，例如山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor® 488）（Ab138205） -封固剂 -加湿室 实验步骤 1.将固定的样品在PBS/0.1% Triton X-100中室温孵育5分钟，进行透膜处理。 2.用PBS清洗三次，每次在室温下放置5分钟。 3.吸干载玻片并加入200 μL封闭缓冲液（PBS/0.1% Tween 20 + 5%血清）。 3.1将载玻片平放在加湿室中并在室温下孵育1-2小时。 3.2然后用PBS冲洗一次。 注意：我们建议使用来自二抗宿主物种（或密切相关物种）的血清，例如，如果使用山羊抗兔结合物，则在封闭缓冲液中使用山羊血清。 4.加入100 μL在封闭缓冲液中以1:200稀释的一抗。然后将载玻片放在加湿箱中，在4°C下孵育过夜。 提示：您可以准备不含一抗的载玻片作为阴性对照。 5.第二天，室温下用 PBS/0.1% Tween 20 清洗载玻片三次，每次10分钟。 6.吸干载玻片并加入100 μL适当的二抗（在PBS中按1:500稀释）。 6.1将载玻片平放在加湿室中，避光，室温下孵育1-2小时。 6.2用PBS/0.1% Tween 20 清洗三次，每次5分钟，避光。 7.沥干液体，将载玻片封固在永久性或水性封固剂中，并用荧光显微镜观察。 应用 1）细胞凋亡研究： 研究细胞凋亡过程中caspases的激活状态，了解细胞死亡的分子机制。 2）药物筛选和毒性测试： 评估药物或化合物对细胞凋亡的影响，并筛选诱导或抑制细胞凋亡活性的候选药物。 3）细胞信号转导研究： 研究细胞信号通路影响caspases的活化及细胞凋亡的过程。 4）发育生物学： 研究caspases在胚胎发育和组织形态发生过程中程序性细胞死亡中的作用。 5）免疫学研究： 研究caspases在T细胞、B细胞等免疫细胞中对免疫反应的调控作用。 如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。
阿拉丁标签抗体 ｜ 特异性识别，助力科学发现 【什么是表位标签？】 表位标签是添加到目标蛋白质上的小型多功能蛋白质序列，科学家可以轻松地对其进行检测、纯化和研究。可以把它们想象成分子铭牌！ 【表位标签抗体为何重要？】 表位标签抗体在现代生物技术和生命科学中发挥着至关重要的作用。它们帮助研究人员揭开细胞过程、蛋白质相互作用等的神秘面纱！ 【主要应用】 1、免疫沉淀（IP）：轻松分离和研究您感兴趣的蛋白质。2、Western Blotting（WB）：快速检测标记蛋白质。3、免疫荧光（IF）：精确观察蛋白质定位。4、染色质免疫沉淀（ChIP）：轻松揭示 DNA 蛋白相互作用。 【产品优势】 1、高特异性2、卓越的灵敏度3、与各种应用兼容4、经过严格的可靠性测试 【突破研究】 参与突破性研究！我们的表位标签抗体正在帮助全世界的科学家突破知识的边界。请访问我们的网站，探索我们丰富多样的产品目录，提升您的研究水平！让我们通力合作，推动科学认识向前发展！一起揭开细胞宇宙的秘密！ 阿拉丁产品项目号产品名称Ab105284GFP Mouse mAbAb106776HA tag Mouse mAbAb086831His tag Mouse mAbAb116621Myc tag Mouse mAbAb105277Recombinant GFP AntibodyAb133828Recombinant V5 tag AntibodyAb097003Recombinant c-Myc AntibodyAb134509VSV-G tag Mouse mAb 欢迎访问我们的网站了解更多详情，并浏览我们全面的阿拉丁标签抗体。
阿拉丁药靶抗体 ｜ 癌症治疗的明星分子 阿拉丁®药靶抗体 药靶抗体是指针对特定药物靶点的抗体。在药物研发过程中，药靶抗体可用来研究药物的作用机制、药物的靶点以及药物与靶点的相互作用。 药靶抗体已被开发并批准用于治疗多种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病、传染病和炎症等。 主要作用机制 「一」 阻断或抑制受体或配体的特异性结合 抗体可靶向疾病过程中涉及的特定分子或受体结合并抑制其活性，阻断相关信号通路、抑制受体多聚化、破坏细胞间的相互作用。 「二」 增强免疫效应 靶向抗体可刺激免疫系统锁定并摧毁特定细胞或分子。包括抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）、抗体依赖细胞介导的吞噬作用（ADCP）和互补依赖的细胞毒性（CDC）等。 「三」阻断免疫检查点 CTLA-4、PD-L1、CD96等免疫检查点抑制剂通过抗体阻断其受体介导的免疫激活，进而杀伤肿瘤细胞。 「四」运送药物或毒素 抗体可以与小分子药物或毒素连接在一起，通过抗体的靶向性将药物或毒素输送到特定细胞或组织。从而增强治疗剂的输送和疗效，同时最大限度地减少脱靶效应。 主要应用 · Functional Assay· ELISA· FACS· Animal model 为什么选择阿拉丁？ · 现货数量多，规格齐全：阿拉丁拥有1mg、5mg、10mg等多种包装满足您不同的使用需求。· 价格实惠，高性价比：部分产品提供试用装免费申领。· 自身应用验证，更权威：阿拉丁产品官网拥有产品的相关验证，更具可靠性，权威性。 应用前景 抗体靶向药物在疾病的诊断和治疗中发挥了独特的优势和作用，尤其是针对癌症、心血管疾病和感染等重大疾病，展现出巨大的治疗潜力和广阔的应用前景。阿拉丁为您提供种类丰富的药靶抗体，严格的质量管控为您解除产品的后顾之忧！ 阿拉丁产品项目号产品名称靶点I412009InfliximabTNF-αB411998BevacizumabVEGFR412001利妥昔单抗CD20T305227曲妥珠单抗HER2A411996阿特珠单抗PD-L1 欢迎访问我们的官网，了解更多关于阿拉丁药靶抗体的信息。
FITC标记多糖——荧光探针下的多糖世界 荧光素异硫氰酸酯（Fluorescein Isothiocyanate, FITC）是一种绿色荧光染料，广泛应用于生物标记和成像技术。多糖作为重要的生物大分子，参与了众多生物过程和功能。将FITC标记在多糖上，使其在荧光显微镜或流式细胞仪等设备下进行可视化和定量分析，在生物医学研究中具有重要意义。本文将着重介绍几类常见的FITC标记多糖，并详细讨论其在实验技术和生物医学应用中的重要作用。 常见的FITC标记多糖 FITC标记透明质酸 透明质酸（Hyaluronic Acid, HA）是一种天然存在于结缔组织、上皮组织和神经组织中的多糖。它在组织修复、细胞迁移、肿瘤生物学等方面具有重要作用。通过FITC标记透明质酸，可以实现对其在细胞和组织中的动态分布和代谢途径进行研究。 FITC标记葡聚糖 葡聚糖（Dextran）是一种由葡萄糖单元组成的多糖，常用于血浆扩容剂和药物载体。FITC标记葡聚糖主要用于研究其在生物体内的分布和清除过程，以及在药物输送系统中的作用。 FITC标记几丁质和壳聚糖 几丁质（Chitin）和壳聚糖（Chitosan）是由N-乙酰葡糖胺和葡糖胺组成的多糖，广泛存在于甲壳类动物的外骨骼中。FITC标记几丁质和壳聚糖用于研究其在生物降解、生物相容性以及作为药物递送载体中的应用。 FITC标记海藻酸钠 海藻酸钠（Sodium Alginate）是一种从褐藻中提取的阴离子多糖，常用于生物材料和药物递送系统。通过FITC标记海藻酸钠，可以研究其在生物材料中的作用和性能，如细胞包裹和释放机制。 实验技术 荧光显微镜成像 FITC标记多糖在荧光显微镜下具有优异的成像效果。通过共聚焦显微镜，可以获得多糖在细胞内外的三维分布图像，研究其在细胞迁移、组织修复和药物递送中的动态变化。1. 样品制备：将FITC标记的多糖加入细胞培养基中，与细胞共同孵育一段时间后，固定细胞并进行染色。2. 成像：使用共聚焦显微镜对样品进行成像，获取多糖在细胞中的分布图像。 流式细胞术分析 流式细胞术是用于定量分析FITC标记多糖在细胞表面结合和摄取情况的重要技术。通过检测细胞内外的荧光强度，可以研究多糖与细胞表面受体的相互作用及其在细胞内的代谢过程。1. 细胞处理：将FITC标记的多糖加入细胞悬液中，与细胞孵育适当时间后，用缓冲液洗涤去除未结合的多糖。2. 检测分析：使用流式细胞仪检测细胞的荧光强度，分析多糖在细胞中的结合和摄取情况。 生物材料表征 FITC标记多糖在生物材料中的应用广泛，通过荧光标记技术可以直观地观察多糖在材料中的分布和降解情况。1. 材料制备：将FITC标记的多糖掺入生物材料中，制备成所需形态（如水凝胶、薄膜）。2. 表征分析：使用荧光显微镜或荧光光谱仪检测材料中的荧光分布，研究多糖在材料中的分布和降解特性。 生物医学应用 细胞成像与跟踪 FITC标记透明质酸、葡聚糖等多糖在细胞成像中应用广泛。通过荧光显微镜，可以实时跟踪多糖在细胞内外的分布，研究其在细胞迁移、组织修复和肿瘤生物学中的作用。1. 细胞迁移：FITC标记透明质酸可以用于研究其在细胞迁移过程中的作用，揭示其在创伤愈合和癌细胞转移中的机制。2. 组织修复：通过标记透明质酸，可以研究其在组织修复中的分布和作用，优化治疗策略。 药物递送系统 FITC标记海藻酸钠、壳聚糖等多糖在药物递送系统中的应用，为提高药物的靶向性和疗效提供了新的思路。通过荧光追踪技术，可以监测药物在体内的分布和释放情况，优化药物递送系统。1. 药物释放监测：FITC标记海藻酸钠微球可以用于研究其作为抗癌药物载体的效果，追踪药物在肿瘤组织中的释放和分布。2. 靶向递送：FITC标记壳聚糖纳米粒子可以用于研究其在靶向递送中的性能，提高药物的治疗效果和减少副作用。 疾病诊断与治疗 FITC标记多糖在疾病诊断和治疗中具有重要应用。通过荧光标记技术，可以开发新的生物标志物用于疾病的早期诊断和疗效监测。1. 早期诊断：FITC标记透明质酸可以用于检测血清中透明质酸水平的变化，作为肝纤维化的早期诊断标志物。2. 疗效监测：通过标记多糖，可以实时监测治疗过程中生物分子的动态变化，评估治疗效果。 生物相容性与免疫研究 FITC标记几丁质和壳聚糖在生物相容性和免疫研究中应用广泛。通过荧光标记技术，可以直观地观察多糖与细胞或组织的相互作用，评估其生物安全性和免疫调节作用。1. 生物相容性：FITC标记壳聚糖可以用于研究其在生物医用植入材料中的生物相容性，优化其制备工艺和应用效果。2. 免疫调节：FITC标记细菌多糖可以用于研究其在免疫细胞中的摄取和处理机制，揭示其在感染和免疫调节中的作用。 技术挑战与解决方案 尽管FITC标记多糖在生物医学研究中具有广泛的应用前景，但在实际操作中仍存在一些技术挑战。1. 标记效率：多糖分子结构复杂，标记位点有限，可能导致标记效率较低。通过优化反应条件，如调整pH值、反应温度和时间，可以提高标记效率。2. 标记均一性：多糖分子大小和结构的异质性可能导致标记的不均一性。为克服这一问题，可以通过改进多糖的纯化和预处理方法，获得更加均一的多糖样品。3. 标记稳定性：FITC标记的多糖在储存和使用过程中，可能会发生荧光淬灭或脱落。为提高标记稳定性，可以优化标记反应条件，并在储存和使用过程中注意避光、防潮，低温保存。 未来发展方向 随着生物医学技术的发展，FITC标记多糖的应用前景将更加广阔。1. 多功能标记：通过结合多种荧光染料，可以实现多功能标记，研究多种生物分子的相互作用和调控机制。2. 智能药物递送：开发基于FITC标记多糖的智能药物递送系统，实现药物的可控释放和靶向治疗，提高治疗效果。3. 高通量筛选：通过高通量筛选技术，开发新型FITC标记多糖，应用于生物医学研究和临床诊断。 结论 FITC标记多糖在生物实验和生物医学研究中具有重要应用。通过荧光标记技术，可以实现多糖在细胞和体内的可视化和定量分析，促进了多糖在细胞迁移、组织修复、药物递送、疾病诊断和治疗等方面的研究。尽管在技术应用中仍面临一些挑战，但通过不断优化和改进，FITC标记多糖将在未来生物医学领域发挥更加重要的作用。 阿拉丁：
细菌的外衣——脂多糖LPS 脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）是革兰氏阴性细菌外膜的重要成分，对细菌的生存和致病性具有重要影响。LPS位于细菌外膜的外层，在无荚膜菌株中直接暴露在细胞表面。脂多糖的复杂结构和多样性使其成为细菌与宿主相互作用的关键因素，深入理解其结构与功能对于微生物学、免疫学以及药物开发研究具有重要意义。一、 结构组成 完整的细菌脂多糖是由分子量为10-20 kDa的大分子组成，其结构包括三个主要部分：疏水的脂质A、亲水的核心多糖链和特异性的O抗原寡糖侧链。图1：脂多糖结构图 脂质A 脂质A是脂多糖的疏水部分，负责其毒性特性。脂质A的核心结构由β-葡萄糖胺-(1→6)-葡萄糖胺-1-磷酸基底组成，两端附有脂肪酸酯。这种结构在不同的革兰氏阴性菌中有所不同，表现为脂肪酸链的长度和饱和度的变异性，但在同一种细菌中却相对保守。 脂质A的毒性主要通过激活宿主的TLR4（Toll样受体4）信号通路来实现，从而诱导强烈的免疫反应。这种反应包括促炎细胞因子的分泌，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1（IL-1），这些因子在引起败血性休克和全身炎症反应综合征（SIRS）中扮演重要角色。 核心多糖 核心多糖由内核和外核组成。内核通常含有1至4个KDO（3-脱氧-α-D-甘露辛酸）分子，这些分子附着在双糖核心上。KDO是脂多糖的特征性成分，其存在对于生物活性脂质A的形成至关重要。尽管KDO被认为是维持细菌生存必需的成分，但研究表明，某些KDO缺失的菌株仍能存活，这说明KDO的重要性可能因菌株而异。 内核还包含庚酮糖单糖（如L-甘油-α-D-甘露庚糖吡喃糖）和磷酸基团，这些成分增加了细胞膜的负电荷，有助于稳定细胞结构。这些磷酸化修饰不仅增强了细菌对环境压力的耐受性，还可能在细菌-宿主相互作用中发挥调节作用。内核的组成可以显著影响脂多糖的生物学功能，例如，通过影响其在宿主细胞表面的识别和结合。 外核则由更常见的己糖组成，包括葡萄糖、半乳糖和N-乙酰氨基葡萄糖。外核的结构较内核更具多样性，这种多样性在不同细菌种类中差异显著。外核多糖的变异性是细菌适应不同环境和宿主的重要因素之一。外核部分的修饰，如乙酰化和甲基化等，可以影响脂多糖的抗原性和免疫反应。 O抗原 O抗原是一个重复的寡糖单位，通常由2至6个糖组成。O抗原是脂多糖最具变异性的部分米乐YY易游,，不同的O抗原结构用于鉴定和分配细菌的血清型。例如，O抗原的差异用于区分大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门氏菌（Salmonella enterica）和霍乱弧菌（Vibrio cholerae）。O抗原的变异性不仅影响细菌的抗原性，还影响其在宿主体内的免疫逃逸能力。 脂多糖的核心部分和脂质A部分可能有一定的结构变异，而O抗原则具有高度的结构变异以及重复单位数量的变异。这些差异导致脂多糖制剂中存在显著的异质性。由于脂多糖是异质的，并且倾向于形成不同大小的聚集体，因此这些聚集体的“分子质量”范围为1-4百万道尔顿或更大。当脂多糖用十二烷基硫酸钠（SDS）和热处理时，分子质量约为50-100 kDa。脂多糖聚集体的存在对其生物学功能也有重要影响，例如，通过影响其在宿主细胞中的递送和识别。 二、 功能与应用 脂多糖在革兰氏阴性细菌中发挥多种保护作用，帮助细菌抵御胆盐和脂溶性抗生素的侵袭。脂多糖是耐热的内毒素，长期以来被认为是人类败血性休克的重要因素之一，更普遍地说，在正常哺乳动物细胞中引发强烈的免疫反应。脂质A部分被确定为脂多糖内毒素活性的关键。这是由Galanos等人通过发现合成和天然来源的Escherichia coli脂质A制剂之间的生物活性结果（包括内毒素活性）相同来证明的。脂多糖的活性受体被确定为CD14/TLR4/MD2受体复合物，促进分泌促炎细胞因子，包括肿瘤坏死因子-α和白介素-1。虽然脂质A成分主要负责免疫反应激活，但Salmonella enterica脂多糖的多糖成分也对于NF-κB激活是必要的。 脂多糖制剂广泛用于研究其结构、代谢、免疫学、毒性及生物合成等方面。例如，通过脂多糖制剂可以诱导生长因子的合成和分泌，如白介素。这些研究有助于理解细菌感染机制，并为开发抗菌药物提供靶点。由于其与败血症的关系，脂多糖已被研究以确定可能的抗体和脂多糖生物合成抑制剂的靶点。 脂多糖的作用不仅限于免疫系统激活，还包括在细菌对宿主防御机制的逃逸、调节细胞信号通路以及影响宿主细胞功能等方面的广泛影响。研究表明，LPS与宿主细胞膜上的多种受体相互作用，除了经典的TLR4途径，还涉及CD14、MD-2和其他共受体。这些相互作用可以激活多种细胞内信号通路，包括NF-κB、MAPK和PI3K/Akt等，最终导致多种细胞反应，如细胞凋亡、炎症反应和免疫逃逸。 三、 提取与纯化 脂多糖的提取方法包括TCA法、苯酚法及苯酚-氯仿-石油醚法。TCA提取的脂多糖在结构上类似于苯酚提取的，具有相似的电泳图谱和内毒性。主要差异在于提取后残留的核酸和蛋白质污染物的数量。TCA提取物含有约2%的RNA和约10%的变性蛋白，而苯酚提取物含有高达60%的RNA和不到1%的蛋白质。进一步通过凝胶过滤色谱纯化，去除了大部分存在于苯酚提取的脂多糖中的蛋白质，但制剂仍含有10-20%的核酸。进一步使用离子交换色谱纯化，得到的脂多糖产品含有不到1%的蛋白质和不到1%的RNA。 脂多糖的提取和纯化对于后续的功能研究和应用至关重要。高纯度的脂多糖样品不仅能提供更可靠的实验数据，还能减少实验中的干扰因素，确保研究结果的准确性和重复性。优化的提取和纯化方法有助于获得高质量的脂多糖样品，从而推动脂多糖在生物医学研究中的应用。 结语 脂多糖作为革兰氏阴性细菌的重要成分，在细菌的致病性和宿主的免疫反应中扮演着重要角色。通过研究脂多糖的结构与功能，科学家们可以揭示其在细菌生存与致病过程中的机制，进而提高对细菌感染的防控能力。研究脂多糖不仅有助于理解细菌的致病机制，还能为疫苗开发、免疫治疗和抗菌药物设计提供新的靶点和策略。通过深入的结构分析和功能研究，科学家们可以进一步揭示脂多糖在细菌致病性和宿主免疫反应中的作用，为临床抗感染治疗提供新的思路和方法。 购买阿拉丁公司的高纯度脂多糖产品可以为您的研究提供强有力的支持。阿拉丁公司致力于提供优质的科研试剂，确保产品的高纯度和高活性，为科学研究的顺利进行保驾护航。通过选购阿拉丁公司的脂多糖产品，您可以获得可靠的实验结果，推动您的科研工作取得新的突破。 阿拉丁：
新型抗菌利器——抗菌肽 随着全球细菌耐药性的日益增加以及新型传染病的频繁出现，核糖体合成抗菌肽（RAMPs）在抗生素研究领域中逐渐崭露头角，成为一大研究热点。抗菌肽根据其合成途径可分为非核糖体合成肽和核糖体合成肽。非核糖体合成的肽主要存在于细菌和真菌中，这些肽是由肽合成酶组装而成，而非通过核糖体合成。短杆菌肽、杆菌肽、多粘菌素B和万古霉素是此类非核糖体合成抗菌肽的典型例子。这些抗生素在科学研究中已被证明具有很高的有效性，但由于新型细菌耐药性（如耐万古霉素的金黄色葡萄球菌和肠球菌）的出现，使其在新应用方面受到了限制。 一、 核糖体合成抗菌肽的来源及特性 RAMPs来源广泛，遍布从原核生物到人类的各种物种。作为宿主抵御每天暴露于数百万潜在病原体的天然防御机制，抗微生物肽不仅具有抗菌活性，还可能展示出抗病毒、抗寄生虫和抗肿瘤的多功能性。据文献报道，已有超过500种RAMPs被鉴定和描述。其独特的抗生素谱是由氨基酸序列和结构构象共同决定的。RAMPs是由12至50个氨基酸组成的基因编码肽，具有很少的遗传重叠。缺乏序列同源性反映了这些肽在不同物种环境中的形态和功能优化进化。通常，RAMPs是阳离子肽，至少一半的氨基酸残基是疏水的，并且含有少量中性或带负电的残基。其具有相对的疏水和亲脂面的两亲结构，能够有效干扰细菌细胞壁。 二、 RAMPs的作用机制 RAMPs的作用机制包括以下几个关键步骤：1. 肽与细菌细胞表面的结合：RAMPs首先通过静电作用与带负电荷的细菌细胞表面的成分（如革兰氏阴性细菌的脂多糖或革兰氏阳性细菌的酸性多糖）结合。2. 肽的构象改变：在结合过程中，肽发生构象变化，这种变化促进了肽的嵌入和聚集。3. 多个肽单体的聚集：多个肽分子在细菌细胞膜上聚集，形成孔道或破坏膜的完整性。4. 通过细菌细胞壁形成孔：这种聚集最终导致细菌细胞膜的渗透性增加，形成瞬时孔隙，导致细胞成分泄漏和细胞死亡。 针对细菌细胞膜的渗透机制，RAMPs主要有三种理论模型：桶壁模型、胸廓模型和地毯模型。桶壁模型认为肽在细胞膜上形成桶状结构；胸廓模型则认为肽在膜上形成胸廓状孔道；地毯模型则描述肽像地毯一样覆盖在细胞膜表面，导致膜的破裂和细菌死亡。 三、 RAMPs的临床应用前景 RAMPs在临床抗菌药物中的应用前景非常广阔，主要有以下几个优点： 1. 对耐药菌株的有效性：RAMPs对多种耐药菌株表现出显著的抗菌活性。 2. 不易选择出耐药突变体：RAMPs不容易选择出耐药突变体，并且其天然细菌耐药性较低。 3. 与常规抗生素协同作用：RAMPs能与常规抗生素协同作用，特别是对抗耐药突变体。 4. 动物模型中的有效性：在动物模型中，RAMPs被证明能够有效杀死细菌。 5. 快速杀灭细菌：RAMPs能够迅速杀灭细菌，减少感染的严重程度。 6. 补充作用：RAMPs还具有抑制脓毒症等补充作用。 尽管RAMPs在临床上具备理想的候选药物特性，但其结构的多样性使得预测其体内活性存在挑战。设计功能性合成仿生体是一项复杂的任务，微小的肽序列或构象变化可导致体内抗菌和细胞毒性水平的显著差异。为了获得MIC、特异性、稳定性和毒性信息，研究人员利用生物信息学数据库设计了新的合成抗菌肽。 四、 抗菌肽的研究进展 近年来，抗菌肽研究取得了显著进展。研究者们利用现代生物技术手段，如高通量筛选和计算机模拟，发现和优化了多种新的抗菌肽。这些新型抗菌肽在临床前研究中表现出良好的抗菌活性和低毒性，为未来的临床应用奠定了基础。例如： 1. Pexiganan：一种用于治疗糖尿病足感染的抗菌肽。Pexiganan在临床试验中展示了良好的抗菌效果，特别是对抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。 2. Lantibiotics：如Nisin，这些抗菌肽主要用于食品保鲜，但研究表明它们在抗药性病原体的治疗中也具有潜在应用。 3. Defensins：这些是哺乳动物中常见的一类抗菌肽，研究发现它们不仅具有广谱抗菌活性，还能够调节免疫系统，提高机体对病毒和肿瘤的抵抗能力。 4. LL-37：一种人类源的抗菌肽，展示了广谱抗菌活性，并在慢性伤口愈合和抗炎治疗中展现出潜力。 此外，研究人员还探索了抗菌肽在抗病毒、抗肿瘤和免疫调节中的潜在应用。最新的研究表明，某些抗菌肽可以通过调节免疫系统，提高机体对病毒和肿瘤的抵抗能力。例如，LL-37不仅具有抗菌活性，还能通过抑制炎症反应来加速伤口愈合。 结语 选择合适的转染技术取决于实验目的、细胞类型、期望的效率和基因表达的持续时间。化学方法如脂质转染和磷酸钙转染操作简便、成本低廉，而物理方法如电穿孔和微量注射则具有高效率和精确度。病毒转导技术，尤其是腺病毒和慢病毒转导，提供了高效率和稳定的基因表达能力。每种方法都有其独特的优势和局限性，因此，根据研究的具体需求定制方法至关重要。 随着转染技术的发展，它们不仅加深了我们对细胞过程的理解，还推动了新治疗策略的发展，凸显了这些技术在现代生物学研究中的核心作用。欢迎咨询阿拉丁，寻找发现细胞转染相关实验试剂，推动研究进展。 阿拉丁：
细胞内ELISA实验方案 细胞内ELISA（也称为基于细胞的ELISA、细胞蛋白质印迹或细胞印迹）是一种使用比色或荧光读数对培养细胞进行定量的广为接受的免疫细胞化学测定方法，用于量化培养细胞中的靶蛋白或靶蛋白的翻译后修饰。 这里我们提供了96孔微孔板的通用方案。大致流程包括：培养细胞（根据需要进行处理）并将其接种到包被的96孔微孔板中；固定和透化后，将一抗添加到孔中并孵育，然后添加标记的二抗，最后进行检测和分析。 一、准备细胞 粘附细胞可以在推荐的分析微孔板中生长，或直接接种到分析微孔板中并允许其附着贴壁几个小时或过夜。 所需材料 - 96孔微孔板：底部透明（荧光抗体需要黑色壁），最好用胺/胶原蛋白等进行包被，以实现最佳细胞培养条件 - 多通道移液器（推荐） - 蒸馏水或去离子水 - 10×磷酸盐缓冲液（PBS）（80 mM Na2HPO4、14 mM KH2PO4、1.4 M NaCl、27 mM KCl，用NaOH调节p至7.4） - 1× PBS：实验开始时准备。将45 mL 10× PBS稀释于405 mL蒸馏水或去离子水中并充分混合。室温保存。 - 400× Tween-20（20%水溶液） - 1×洗涤缓冲液：实验开始时准备。将625 µL 400× Tween-20稀释于250 mL 1× PBS中并混合均匀。室温保存。 实验步骤 1.将细胞以所需密度接种到96孔微孔板中。对于384孔微孔板，以96孔板密度的四分之一进行接种。 注意：最佳细胞接种密度取决于细胞类型，应根据每个实验确定。例如，在96孔微孔板中，每孔应接种25,000 - 50,000个HeLa细胞。 2.让细胞粘附数小时或过夜。 3.按需要处理附着的细胞，96孔板培养基总体积为100 µL（384孔板体积为96孔板体积的四分之一）。培养基中可接受高达10%的血清。 注意：您应该确定细胞处理的持续时间。当使用目标药物处理细胞时，我们建议包括未处理的细胞和用药物溶剂处理的细胞。 二、将细胞固定至微孔板 所需材料 - 10×磷酸盐缓冲液（PBS）：80 mM Na2HPO4、14 mM KH2PO4、1.4 M NaCl、27 mM KCl，用NaOH调节pH至7.4。 - 20%多聚甲醛 - 蒸馏水或去离子水 - 8%多聚甲醛：使用前立即配制。将6.25 mL蒸馏水或去离子水与1.25 mL 10× PBS和5.0 mL 20%多聚甲醛混合。注意：多聚甲醛有毒，应在通风橱中配制和使用。根据当地法规处理多聚甲醛。 - 实验开始时准备的1× PBS - 96孔微孔板。底部透明（荧光抗体需要黑色壁），最好涂层（胺/胶原蛋白）以实现最佳细胞培养 - 多通道移液器（推荐） 实验步骤 1.立即向含有培养基的孔中加入等体积（100 μL）的8％多聚甲醛溶液。孵育15分钟。 警告：多聚甲醛有毒，应在通风橱中配制和使用。根据当地法规处理多聚甲醛。 2.轻轻吸出微孔板中的多聚甲醛溶液，并用300 μL 1× PBS每孔清洗微孔板3次。 3.在孔中加入100 μL 1× PBS。用密封件盖住微孔板。 提示：此时可以将微孔板在4°C下保存几天。如需长期保存，可在PBS中添加0.02%叠氮化钠。 警告：多聚甲醛和叠氮化钠均有毒，应小心处理并根据当地法规进行处置。 注意：在检测期间或检测前的任何时候都不应让微孔板干燥。 三、细胞通透 建议在孵育步骤中使用板振荡器（~300 rpm）。任何涉及去除缓冲液或溶液的步骤之后，都应在纸巾上轻轻叩击培养板以去除孔中的所有溶液。 所需材料 - 100× Triton X-100（10%水溶液） - 1×PBS - 1×透化缓冲液：使用前立即配制。将250 µL Triton X-100稀释于24.75 mL 1× PBS中并混匀。 - 10×封闭缓冲液 - 2×封闭液：使用前立即配制。将5 mL 10×封闭液稀释于20 mL 1× PBS中。 - 多通道移液器（推荐） - 平板摇床 实验步骤 1.除去PBS，每孔加入200 μL新鲜配制的1×透膜缓冲液。 2.孵育30分钟。 提示：建议在孵育步骤中使用平板振荡器（~300 rpm）。 任何涉及去除缓冲液或溶液的步骤之后都应在纸巾上轻轻敲击培养板以去除孔中的所有溶液。 3.除去1×通透缓冲液并向每孔中加入200 μL 2×封闭溶液。 4.孵育2小时。 注意：建议在孵育步骤中使用平板摇床（~300 rpm）。 任何涉及去除缓冲液或溶液的步骤之后都应在纸巾上轻轻敲击培养板以去除孔中的所有溶液。 四、一抗孵育 我们必须至少在一个孔中省略一抗，以确定实验的背景信号，该背景信号可以从所有测量数据中减去。应针对每个实验条件和每个检测抗体执行此操作。 所需材料 - 细胞内ELISA鉴定的一抗 - 10×封闭缓冲液 - 1×PBS - 1×孵育缓冲液：使用前立即配制。将2.5 mL 10×封闭液稀释于22.5 mL 1× PBS中。 - 多通道移液器（推荐） 实验步骤 1.将提供的抗体储备液稀释于1×孵育缓冲液中，配制成1×一抗溶液。 2 .除去2×封闭液，每孔加入100 µL稀释的一抗溶液，4°C孵育过夜。 提示：为了确定背景信号，请从每个实验条件和所用检测抗体所含细胞的至少一个孔中省略一抗。 五、二抗孵育 所需材料 - 实验开始时准备的1×洗涤缓冲液 - 合适的荧光或HRP标记的二抗 - 10×封闭液 - 1×PBS - 1×孵育缓冲液：使用前立即配制。将 2.5 mL 10×封闭液稀释于 22.5 mL 1× PBS中。 - 多通道移液器（推荐） 实验步骤 1.按照试剂盒使用说明（或抗体数据表）中的指示，在1×孵育缓冲液中稀释，制备1×二抗溶液。 注意 ：保护荧光标记抗体免受光照。 2.除去一抗溶液，用250 μL 1×洗涤缓冲液/孔洗涤微孔板3次。 3 .除去1×洗涤缓冲液，每孔加入100 µL 1×二抗溶液，孵育2小时。 4 .弃去二抗溶液，用250 µL 1×洗涤缓冲液/孔洗涤4次。 注意：不要移除最后一次清洗的缓冲液。 六、检测信号 所需材料 - 70%乙醇 - 合适的微孔板读数仪：对于HRP检测，使用能够测量650 nm（最好在动力学模式下）或450 nm吸光度的微孔板读数仪。对于荧光标记抗体，使用相应的成像系统（如LI-COR® Odyssey®或Aerius®的近红外成像系统）。 - 对于HRP检测，HRP底物溶液 - 0.5 M盐酸 实验步骤 1.如果使用荧光偶联二抗，请用70%乙醇擦拭微孔板底部和扫描仪表面，然后在LI-COR® Odyssey®系统上扫描微孔板。 提示：根据制造商的说明使用700 nm和800 nm通道（建议强度范围为 5-7）。 2.对于HRP标记的二抗，移除最后一次清洗液并将微孔板面朝下擦干以去除多余的液体。并添加100 µL HRP底物。 戳破所有气泡，如下设置微孔板读数仪参数，并记录蓝色变化： - 模式：动能 - 波长：650nm - 时间：30分钟 - 间隔：20秒至1分钟 - 摇动：读数之间摇动 - 替代方案：代替动力学读数，在用户定义的时间，记录640 nm处的终点OD，或通过添加100 µL 0.5M HCl来停止反应并记录450 nm处的OD。 3.保存数据并将原始数据导出到Excel。 提示：使用LI-COR® ICW软件或其他合适的数据分析软件（例如 Microsoft Excel 或 GraphPad Prism）分析数据。 细胞内ELISA的提示和技巧总结： 1.关于细胞 -细胞接种密度、培养基和其他生长条件是实验成功且可重复的关键。 -用户应定义特定于细胞类型的参数。 2.细胞附着和固定 -粘附细胞可以在分析微孔板中直接生长和处理。 -可以用显微镜检查细胞附着情况。 -当细胞完全附着时，可以去除培养基并替换为含有处理试剂的培养基。 -含有高达10%胎儿血清的培养基不会干扰细胞固定和与微板的交联，但可能会干扰处理试剂。 3.细胞处理 -使用药物（抑制剂或激活剂）时，实验中应同时包括未处理的细胞和仅用药物溶剂处理的细胞。 4.细胞接种密度 -检测微孔板的细胞接种密度取决于细胞类型。它取决于细胞大小（对于粘附细胞，则为直径）和目标蛋白的丰度。 -一般建议使用单层以获得稳健的信号。 -可以通过显微镜观察连续稀释细胞的细胞密度来确定细胞接种的数量。 -对于粘附细胞，在微孔板（孔尺寸相似）中制备细胞的连续稀释液，并在显微镜下观察细胞密度。在合适的细胞密度范围内，取更大数值的细胞密度将产生更强的整体信号并增加微小信号的检出率。例如，HeLa和HepG2细胞应每孔接种25,000至50,000个细胞，而人类成纤维细胞（HdFN）-每孔接种15,000至 25,000个细胞。 5.对照设置 至少在一个孔中省略一抗，以便为实验提供背景信号，该背景信号可以从所有测量数据中减去。应针对每个实验条件和每个检测抗体执行此操作。 6.高通量 该检测也可采用384孔微孔板形式进行，使用四分之一体积的试剂和细胞。 如需了解更多产品详情，请前往阿拉丁官网查询。
使用ICP OES评价碳酸锂和氢氧化锂的纯度等级简介 近年来，全球对锂盐的需求大幅增长，这主要归因于锂离子电池（LIB）市场的迅速扩张，特别是汽车行业。在全球交易的关键锂化合物中，碳酸锂（Li2CO3）和氢氧化锂（LiOH）占据重要地位。这些化合物是从地质矿石和地下卤水等自然资源中提取的，随后被用于各种锂离子电池组件（图1）。虽然碳酸锂的提取成本效益较高，但由于氢氧化锂具有低温分解的特性，更有利于实现更可持续的电池阴极制造过程并提高最终产品的耐久性，因此更受欢迎。图1. 从矿石到电池组件的锂提取简化示意图 电池和原材料制造商需要确保用于生产电池组件的所有物质都经过元素杂质的检测，如碱金属和碱土金属以及过渡金属，以确保最终产品的性能不会受到影响。纯度是增加材料价值和最终盈利能力的一个关键区别因素，因此严格和定期的质量控制至关重要。电池级锂盐中元素杂质的分析通常基于中国标准GB/T-11064.16-2013和国际电工委员会（IEC）62321标准中描述的方法，其中电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）是两者都推荐的技术。ICP-OES被认为是电池材料分析测试的关键技术，因为它可以在短时间内进行完整的多元素分析，并且能够处理各种潜在的样本类型。 实验部分 仪器参数和实验条件 本实验采用iCAP PRO XP ICP OES Duo仪器来评估Li2CO3和LiOH中的45种痕量元素，旨在确定这些化合物及其盐组成中的总杂质浓度。仪器在智能全范围（iFR）模式下运行，采用轴向等离子体观察，能够在单次曝光中同时实现紫外和可见光谱范围内的高灵敏度测量。这显著减少了样品周转时间，加快了结果交付，并为实验室节省了成本。样品引入系统按常规配置用于水溶液分析，但火炬除外，火炬特别选择了陶瓷D型火炬。这一选择是为了提高样品基质的耐受性并减少维护需求，因为高纯度石英火炬在长时间暴露于这些特定样品类型后可能会出现损坏和失透现象，需要频繁更换。陶瓷D型火炬可以轻松有效地处理这两种样品类型，始终产生稳健可靠的数据。 表1概述了样品引入设置的具体细节和典型的仪器参数。iCAP PRO系列ICP-OES同时测量整个波长范围的能力使得无论分析物或波长的数量如何，都能实现快速样品分析。在本实验中，实现了对45种分析物的全面定量分析，每个样品的总运行时间为144秒。表1. 仪器配置和典型操作参数 样品制备 分析包括两个Li2CO3样品，一个纯度等级为99.9%，另一个为99.998%，还有一个纯度为98%的LiOH（一水合物）样品。从每个样品中准确称取250±2mg的精确等分试样，放入指定的样品管中。随后，谨慎地向每个样品中加入1mL HNO3（微量金属等级）。之后让样品静置15分钟，以确保中和反应完成。之后，使用超纯水进一步稀释样品，直到达到50mL的最终体积。 标品或参考物质 利用单元素标准品对每个分析物进行校准，在2%（v/v）HNO3中制备了校准空白和一系列跨越三个数量级浓度范围的校准标准品。这些标准品的特定浓度分别为50、200、500、1,000和2,000 µg·L-1。 为了减轻由于样品中高锂含量导致的易电离元素（EIE）的干扰，校准标准品和校准空白都进行了基质匹配和强化，确保溶液中最终的锂浓度为1,000 mg·L-1。 此外，为了在整个实验过程中持续监测和调整任何物理干扰，在整个实验过程中，通过T型接头在线钇的内部标准溶液。 质量控制和方法验证 为了验证本研究中的校准质量，我们使用了包含所有分析物200 µg·L-1的标准溶液作为质量控制（QC）标准。此外，我们还通过向选定样品中添加50 µg·L-1和1 mg·L-1的浓度来增强方法的准确性。加标样品和原始样品都经过了超过10小时的连续测量，以确保所提出方法的稳健性。 结果和讨论选择性、灵敏度和线全面概述了本研究中考察的分析物，包括基于相对灵敏度和无干扰条件选择的波长，以及获得的分析性能指标。如图1中的校准曲线所示，在整个校准范围内，所有分析物波长的确定系数（R2）均超过0.9996。此外，表格还包含了仪器检测限（IDL），该检测限来自空白和低浓度校准标准的三次重复测量，以及原始固体样品中的方法检测限（MDL），后者通过将IDL乘以样品制备过程中应用的稀释因子来计算。值得注意的是，45个目标元素中有43个的MDL明显低于1 mg·L-1，表明整个分析物系列都具有出色的灵敏度。 此外，如果需要，还可以使用相同的方法监测样品中的总锂含量，只需使用不同的非基质匹配标准和包含在单独校准块中的空白即可。表2. 各元素的适宜波长、最低检测限（LOD）、R2值和方法检测限（MDL）列表 准确性 如前所述，我们向样品中添加了不同浓度的特定分析物，以评估该方法在预期这些杂质相似浓度下的准确性。值得注意的是，所有加标回收率都保持在预期浓度±20%的范围内。表3. Li2CO3和LiOH样品中50 µg·L-1和1 mg·L-1加标的回收率（N=8）。如果未给出结果（在表中以“-”表示），则由于样品中发现的浓度水平而未进行加标回收率测试。 易电离元素（EIE）效应 样品中存在的易电离元素（EIE），如钠、钾或锂等，以其低电离势为特征，可能破坏等离子体中的电离平衡。这些EIE释放出的电子随后被等离子体中的其他元素所利用，从而改变了离子和原子之间的平衡。因此，这导致原子发射线的强度增加，离子发射线的强度减少，进而改变了特定分析物的表观浓度。当使用非基质匹配的标准时，这种现象被归类为化学干扰，可能导致错误的结果（如图2所示）。然而，本研究中实施的基质匹配措施防止了不准确结果的出现。图2. 当校准溶液和实际样品基质不匹配时，易电离元素可能导致内标回收率差且不一致。表示100%回收率的数据点代表间歇运行的校准空白。随着序列延长数小时，回收率预计会进一步恶化。然而，本研究通过采用基质匹配来缓解这一问题，显著提高了数据的稳定性。 Li2CO3和LiOH原材料的真实样品组成/纯度检查 本研究中调查的三种锂盐的定量分析结果汇总在表4中。结果表明，这些盐中的总杂质水平与声明的纯度声明相吻合。在所有样品中检测到的主要杂质是碱性和碱土元素，如钠、钾、镁和钙，尽管也存在一些常见的过渡金属，如铬、铁或锌。然而，值得注意的是，即使具有相同纯度等级的样品，其杂质组成也可能存在显著差异。例如，整体纯度超过98%的LiOH样品中的钙和硅含量显著低于整体纯度超过99%的Li2CO3样品，但铝和硫的含量较高。这种差异可能会影响这些原材料的进一步加工流程。对于广泛的分析物来说，杂质水平低于ICP-OES的检测限，表明需要一种灵敏度更高的分析技术，如电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）。表4. 本研究中测量的原材料样品的痕量元素组成 典型工作周期内的稳健性验证 所开发的方法通过进行为期十二小时的稳健性测试以进行连续测量，在较长一段时间内对准确性进行了严格的测试和验证。这种模拟反映了现实工业场景，其中需要不间断地监测数百个此类样品，以保证产品的一致质量和均一性。稳健性测试涵盖了Li2CO3和LiOH的所有三个样品，包括其原始状态和加标等分试样。实验序列以校准块开始，包括空白和标准品，随后进行初始质量控制检查（ICV = 初始校准验证）。之后，每20个未知样品后分析一次QC样品以确保一致性。 结果表明，在整个实验过程中没有显著的信号漂移或QC失败。内标的回收率、QC样品浓度回收率和加标浓度回收率在整个分析过程中保持稳定。具体而言，内标回收率保持在90-100%的范围内（图3）。同样，所有分析物的QC回收率均在可接受的80-110%范围内，其中大多数集中在更窄的85-100%范围内（图4）。图3. 在12小时稳健性测试分析中，内标回收率表现优异，校准溶液与线. 稳健性测试分析期间的QC回收率。红色双线%的区间。 结论 本应用说明介绍了一种快速、灵敏、精确且稳健的方法，用于分析各种常见的锂离子电池原材料，特别是Li2CO3和LiOH。iCAP PRO XP ICP-OES Duo仪器能够同时测量和表征两种样品类型中的45种痕量分析物，为终端用户提供了一种优雅且高效的方法，用于可靠地日常测量数百个样本。 在本研究中，使用统一的方法分析了Li2CO3和LiOH盐，该方法通过iCAP PRO XP ICP-OES Duo同时覆盖了45种元素。对于19种元素，方法检测限（MDL）低于0.01 mg·L-1；对于23种元素，低于0.1 mg·L-1；剩余2种元素的MDL略高于1 mg·L-1。 由于单次曝光中对所有分析物的数据同时采集，多元素分析得以迅速完成，每个样本仅需2分24秒（包括三次重复、进样和清洗）。 该方法的准确性和精确性通过真实样本基质的精确加标回收率、出色的QC回收率和在12小时稳健性测试期间稳定的内标回收率得到证明。由于校准标准和空白样本与实际样本基质匹配，因此基质中高锂浓度引起的增强电离效应（EIE）并未降低数据质量。 跨越十二小时的不间断分析突显了iCAP PRO XP ICP-OES Duo在处理不同组成的锂盐方面的卓越稳健性。 阿拉丁官网：
靶点药物发现：数量稀缺，效率低下，其有效性究竟几何？尽管基于靶点的药物发现是当前药物研发的主流方法，但最新的全面评估显示，其成果并不尽如人意。该方法所发现的药物数量相对较少，且其治疗效果在很大程度上依赖于非靶点机制。这让人不禁对这种方法产生疑问：它真的如我们所期望的那样有效吗？还是只是一个外表华丽但实际价值有限的“金箔”？本文将依托Arash Sadri的研究，对基于靶点的药物发现的效率及其与非靶点机制的关系进行深入探讨。 药物发现背后的挑战与困境回顾过去150年的文献，我们发现，仅有大约9.4%的小分子药物是通过基于靶点的检测手段得以发现的。尽管获得批准的候选药物与进入临床研究的候选药物之间的比率约为13%，但在更为复杂的中枢神经系统疾病和癌症领域，这一比例竟低至0.4%。此外，新药研发还面临着效率低下、成本高昂以及制药公司纷纷撤退等重重困难。针对这些问题，研究者指出，当前主流的基于靶点的药物发现方法带有明显的还原论倾向。这种方法过分聚焦于寻找能够调节单一或少数几个蛋白质的药物，却忽视了细胞内和细胞外复杂的网络结构及其反馈机制。这种方法的盛行已经持续了数十年，恰好与药物研发生产力的下降相吻合。因此，我们需要重新审视并改进现有的药物研发策略，以应对当前的挑战。 靶向药物研发效率低下：现状反思与未来挑战尽管基于靶点的药物发现方法一直备受瞩目，但其效率和效果却饱受争议。在此背景下，研究者提出了一个大胆的假设：药物发现效率的下降可能与过度依赖基于靶点的还原论药物发现方法有关。该方法主要聚焦于药物与少数预设“靶点”蛋白的结合，并以此为基础进行分子的选择和优化，通常仅在最后阶段才考虑体内和人体数据。为了验证这一假设，研究者采用了人工手段，对美国FDA在2020年底前批准的所有药物进行了详尽的调查，重点收集了关于药物发现起源的信息。为了确保研究的客观性和准确性，他们提出了以下几个关键定义： “发现起源”：指的是首次观察到某种治疗类别与治疗效果之间存在相关性的时刻。 “治疗类别”：指与某一先导分子相关的一组在化学或药理学上具有相似性的物质。 “基于靶点的药物”：指的是那些发现过程主要依赖于观察分子对蛋白质影响的药物。 “基于表型的药物”：指的是那些发现过程主要依赖于观察分子对生物体表型影响的药物。通过深入的调查和分析，他们发现，与传统的基于靶点的药物发现方法不同，传统方法更加经验主义米乐YY易游,。这种方法依赖于分子对人类和其他生物（如动物、真菌和细菌）的治疗效果来选择和优化分子，因为它缺乏评估药物对单一蛋白质效果的工具。为了得出更加全面和准确的结论，研究者决定进一步扩大研究范围，涵盖所有已批准的药物，并增强分析的精确性和客观性。 表型药物的新路径：超越“靶向”机制，探索“非靶向”替代法与以特定靶点为核心的药物研发方法形成鲜明对比的是“非靶向”机制，这种方法更加关注药物与多个蛋白质之间的复杂交互。尽管基于靶点的还原论药物发现在当前仍占据主流地位，但为了提升药物研发的整体效率，这种反还原论、以证据为基础的方法可能会展现出更大的潜力。借助人工智能和机器学习等先进工具，我们可以优先关注更高层次的表型观察结果，这些结果更接近于患者的实际治疗反应。这种方法的优点在于能够更全面地考虑药物的各种作用机制，避免过度聚焦于单一的靶点，从而为药物研发提供更全面、更综合的方案。研究数据显示，基于表型的药物在所有已获批药物中占据了相当大的比例。这些药物的发现主要源于对非人类或体外表型的观察、对人类表型的观察、对内源分子表型效应的观察，以及受历史上使用过的化合物和作用机制启发的表型观察。这表明基于表型的药物发现方法在药物研发中具有不可替代的重要作用，而且其并不局限于对单一蛋白质的调节。在对比基于表型和基于靶点的两类药物在所有已获批药物以及1995年后获批药物中的比例时，我们发现一个有趣的现象：1995年，即首个“基于靶点”的药物——沙奎那韦（S126514）获得批准的年份，成为了这两种方法发展历程中的一个重要分水岭。图1. 药物发现起源中不同方法的占比。（a）所有已批准的药物；（b）1995年后批准的药物。虽然靶向药物研发在历年获批药物中的占比呈现出逐年增长的态势，但始终未能超越表型药物研发所占的比例。事实上，众多所谓的“靶向”药物都展现出多种“非靶向”治疗机制。以多奈哌齐（D332795）为例，这款药物最初是作为乙酰胆碱酯酶抑制剂被研发出来的，然而后续的研究却发现它具备高达40种独立的治疗机制，包括抗炎、免疫调节、神经保护等多种功能。除此之外，我们还观察到许多已获批准的药物与其治疗“靶点”的亲和力并不强，但它们大多倾向于处于高亲和力百分位数等级。这意味着与高亲和力“靶点”的结合与治疗效果之间存在某种关联。然而，与单一“治疗靶点”的高亲和力结合仅仅是影响药物治疗效果众多因素中的一个。图2. 获批准药物相对于其治疗目标所有ChEMBL配体的亲和力百分位数等级。总的来说，基于靶点的药物研发方法可能过于简化了生物系统的复杂性。相比之下，高层次的表型观察药物提供了一种更为有效的研究和治疗疾病的方法，因为它直接针对治疗效果，并且具有更高的预测性。这种方法将人体的复杂性视为一个“黑箱”，不深入探究低层次的机制，而是直接关注最终的治疗效果。 基于靶点的药物发现：其不可忽视的价值与意义在药物研发的漫长历程中，基于靶点的药物发现始终占据着举足轻重的地位。计算化学、高通量筛选和组合化学等技术，初期备受研发界的瞩目与追捧，然而随着科技进步与研究的深入，它们的局限性逐渐浮出水面。尽管如此，这些技术依然是当前药物研发过程中不可或缺的核心要素。针对特定的疾病，如单基因孟德尔疾病，基于靶点的药物研发方法充分展现了其独特的价值，这一点得到了单克隆抗体成功研发案例的进一步验证。同时，在寻找类似物的药物研发过程中，基于靶点的策略同样发挥了至关重要的作用，尤其是在优化和改进药物结构方面。然而，在针对某些复杂疾病的研发过程中，收集高级数据可能既昂贵又繁琐，此时基于靶点的药物研发方法则能够为研发工作提供坚实的基石。尽管如此，单纯依赖单一靶点的方法也存在明显的局限性。为了克服这些挑战，研究人员开始探索多药理学的概念，希望通过同时针对多个靶点来提升药物的疗效。与此同时，系统药理学和网络药理学等新颖方法与传统方法形成鲜明对比，它们从整体角度出发，为治疗复杂疾病提供更全面的解决方案，能够涵盖疾病的多种潜在因素。尽管基于靶点的药物研发方法在某些情况下具有显著优势，尤其是当疾病与特定蛋白质的亲和力密切相关时，未来的药物研发仍需从更宏观的视角来审视疾病的复杂性。为了真正提升药物研发的效率和疗效，我们必须结合循证研究，充分利用新技术和方法来深入探索疾病的多重机制。只有这样，我们才能为药物研发领域带来更加全面和创新的解决方案。 小结总体而言，基于靶点的药物发现仍然是药物研发领域的核心。然而，未来的研发趋势将更加注重整合多种技术和方法，以更全面、更具预测性的视角来审视药物研发问题。结合现代科技的进步，我们需要对疾病进行更加全面和深入的理解，从而更好地满足公众健康的需求，并应对制药行业所面临的挑战。这一转变将推动药物研发领域不断进。yy易游体育,yy易游体育,
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